核酸提取一上午，一测比值2.5，说起这科研路，真是一脸辛酸，我们都知道用OD_260/OD₂₈₀的值判断核酸纯度，可这坑爹的比值是咋来的？

纯DNA是1.8，纯RNA是2.0，谁规定的？答案很简单：标准品测的

核酸、蛋白质在紫外光下有特定的吸收峰，核酸（包括DNA和RNA）的最大吸收值在260 nm左右，主要是由于嘌呤和嘧啶中的共轭双键造成。蛋白质的最大吸收峰在280 nm左右，绝大部分是由色氨酸和酪氨酸引起的。此外，230nm处的吸光值能反映乙醇、GTC、GuHCl、EDTA、多糖等的含量。用纯RNA的标准品进行吸光值测定，分别测得OD₂₆₀和OD₂₈₀处的吸光值，比值为2.0。同理，DNA的比值为1.8。


DNA的OD值要求及优化方法

在实际应用中，一般对于DNA来说，OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.7-1.9之间即可满足绝大部分PCR检测实验需求。

当OD₂₆₀/OD₂₈₀>1.9时，有较大的概率是由于RNA残留导致OD260处吸光值升高，跑一个琼脂糖凝胶电泳一看便知。这个数值提示后续再进行DNA提取实验时，可以用RNase 进行消化，消除影响。

当OD₂₆₀/OD₂₈₀<1.7时，通常是由于蛋白残留造成的，通过琼脂糖凝胶电泳检测时，可观察到点样孔发亮。该状况常见于溶液沉淀法DNA提取。


RNA的OD值要求及质量优化

对于RNA来说，OD₂₆₀/OD₂₈₀在1.9-2.1之间，即可满足荧光定量PCR检测实验需求。

当OD₂₆₀/OD₂₈₀<1.9时，样本中存在蛋白质残留，常见于trizol法提取RNA时，主要是操作中吸入了中间层导致的。在进行此类实验时，吸取80%上清液即可，宁可少吸也不要吸到中间层。

当OD_260/OD₂₈₀>2.1时，RNA产生降解导致OD₂₆₀处吸光值升高，通过琼脂糖凝胶电泳检测，可以看到泳道内弥散的条带。提示我们在RNA提取时应采用新鲜样品，在无RNase的实验环境下快速操作避免样本降解。您也可以尝试TIANGEN RNA Easy Fast系列RNA提取试剂盒，20 min内就能快速完成RNA提取。

值得注意的是，pH及盐离子对OD₂₆₀/OD₂₈₀值有一定影响，酸性溶液或水溶液比弱碱性缓冲液的OD₂₆₀/OD₂₈₀值低0.3-0.4。因此，核酸浓度及质量评估时，应注意核酸稀释液和洗脱液保持一致。